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成立于1970年中期,新英格兰生物实验室公司(NEB)是在酶的分子生物学应用的发现和生产行业的领导者,现在提供基因组研究重组和天然酶的最大的选择。bob网站appNEB继续扩大其产品供应到相关的PCR,基因表达,用于下一代测序,合成生物学,糖生物学,表观遗传学和RNA分析的样品制备区域。bob网站app此外,NEB的重点是加强联盟,促进新技术,以达到主要市场领域,包括分子诊断发展。新英格兰生物实验室是一家私人控股公司,总部设在伊普斯维奇,MA,并拥有独家通过经销商,代理商及七个子公司设在加拿大,中国,法国,德国,日本,新加坡和英国的网络在全球拥有广泛的分布。有关新英格兰生物实验室更多信息请访问

有什么问题用氨苄青霉素选择?

内容由新英格兰生物学实验室

ampicillin.png阻力对抗生素氨苄青霉素通常用作用于基因的克隆和表达质粒的选择标记大肠杆菌和其他细菌。虽然它可以是非常有用的工具,也可以使用这种选择标记,你需要知道,如果你打算使用它的问题。本文提供的是什么这些限制以及如何避免他们一个非常简要的概述。

氨苄青霉素的选择是如何起作用的

氨苄青霉素选择的基础是从质粒携带的表示的水解和抗生素的失活通过β-内酰胺酶BLA基因。问题是:大量产生的-内酰胺酶也会被细菌分泌到培养基中。如果培养处理不当,细胞外-内酰胺酶的积累会使培养基中的氨苄青霉素失活,从而消除选择压力。

在液体培养物,这意味着,该细胞的一部分(可能是非常大的部分)可能不再具有该质粒,使差产生质粒制备物,蛋白表达等。在琼脂平板上,氨苄青霉素降解可导致卫星菌落形成。这些细胞非常小菌落尚未占用的质粒,围绕已经采取了大量殖民地形式BLA含有质粒。人造卫星的形成是因为-内酰胺酶BLA表达菌落在菌落附近降解氨苄青霉素。人造卫星并不一定是个问题,因为当它们被转移到含有新鲜氨苄青霉素的培养基上时就不会生长。

避免质粒丢失

如果您在发现您质粒棉片或低产量不到理想的蛋白表达,β-内酰胺酶积聚可能是你的问题。那么,你如何避免失去质粒使用氨苄青霉素作为选择标记时?这是如何做:

  • 不要让液体培养饱和太久。我建议从来没有生长的培养高于OD600= 3(在溶菌肉汤,也称为LB)。
  • 从起始培养物除去分泌β-内酰胺酶。这可以通过造粒和再悬浮在新鲜,无抗生素培养基发酵剂培养物innoculating主要培养之前完成。
  • 如果您遇到的问题,使用更高浓度的氨苄青霉素。我建议使用200微克/ mL或更高。这使得更难β-内酰胺酶失活所有的氨苄青霉素的是用于避免卫星形成特别有用。
  • 从来没有使用旧的氨苄青霉素的股票或板作为氨苄青霉素将有所分解,得到具有减小的有效氨苄青霉素浓度。有关如何存储和更多信息使用抗生素阅读我们的相关文章抗生素稳定性:保持你的(枪)粉干
  • 如果一切都失败,切换到羧苄青霉素选择。虽然这种抗生素也被β-内酰胺酶失活,过程比氨苄西林出现更慢。出于这个原因,羧苄青霉素选择远比氨苄青霉素更有效。不幸的是昂贵得多!

氨苄西林只是分子生物学中使用的各种麻醉药之一。bob网站app如果你想了解其他常用抗生素的信息,请查看我们的文章抗生素应用于分子生物学bob网站app

你有与氨苄青霉素工作任何提示?如果是的话,请发表评论。

最初发表于2011年修订和更新5月9日在2019年12月17日。

4评论

  1. MugeAtis 2014年9月10日下午2:51

    我有一个question.Can ampcillin股难闻的气味(用乙醇和水混合)是抗生素降解的迹象?经过一定时间后,如3周,我的100微克/ UL放大器。股票开始smell.Should我把它严重吗?

  2. DrKennB 于2013年4月5日在下午6时42分

    我在液体培养中从未遇到过氨苄青霉素的问题。是的,在培养皿中氨苄西林浓度会降低这样就会有卫星菌落生长但我不认为你可以耗尽液体中的浓度到非抗性菌落生长的程度。

    知道巴克利

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