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破坏琼脂糖凝胶的5种方法

破坏琼脂糖凝胶的5种方法

加入第一个实验室后,您可能很快就学到的最早的东西之一是琼脂糖凝胶电泳。倒入和运行琼脂糖凝胶应该是一个简单而常规的过程,您认为这可能不会出错。实际上,有许多令人惊讶的方法可以破坏琼脂糖凝胶。这是琼脂糖凝胶电泳的五个常见罪魁祸首:

1.用水代替缓冲液作为凝胶或运行缓冲液

使用TAE或TBE缓冲液铸造和运行琼脂糖凝胶。由于这两个缓冲区都很清楚,因此很容易将它们误认为是水。如果使用水,将电荷涂在凝胶盒中后不久将融化 - 与这些样品说再见!((选择正确的缓冲区也很重要。)

2.忘记添加溴化乙锭

匆忙,很容易忘记在铸造凝胶之前,在琼脂糖中添加溴化乙锭。当然,没有它,就不可能可视化您的DNA。幸运的是,您可以通过将其浸泡在含有乙锭的缓冲液中来营救未染色的凝胶。实际上,有些人甚至更喜欢以后弄脏它,尽管您会有大量的溴化乙锭废物处置(幸运的是,它可以重复使用几次,然后才能摆脱它)。

3.使用琼脂糖的错误百分比(或类型)

用于分离DNA的琼脂糖的标准百分比为1.0%。在凝胶中使用更多的琼脂糖可以增强较小带的分辨率,而较低的琼脂糖百分比可以使较小的频带快速通过凝胶,从而为您提供更好的分辨率和较大带的分离。如果使用错误的百分比,则很难可视化您的乐队。当使用低于0.8%的琼脂糖百分比时,请注意,因为这些凝胶会变得较弱,并且更容易破裂。

低熔点琼脂糖用于专门应用,例如凝胶结扎。这些凝胶也非常“汤”和脆弱,即使以可比的百分比,因此,请确保在混合一批琼脂糖之前抓住合适的试剂。

4.从电源切换线索

发生的最令人沮丧的错误之一是意外地将铅从电源转换,以便凝胶向后运行。由于井非常接近凝胶的末端,因此,如果您没有立即注意到错误,您很可能会丢失所有样本。在开始电动疗法的前几分钟内检查凝胶并不是一个坏习惯,这也使您有机会确保有电流流动(很容易通过电极的气泡验证)。如果您注意到乐队在为时已晚之前朝错误的方向前进,只需切换潜在客户并以另一种方式运行。

5.将凝胶放在前往成像仪的路上

认真的 - 不要让这种情况发生在您身上。

幸运的是,我们大多数人都不会让这些事情不止一次地发生在我们身上。您从琼脂糖凝胶的不幸中学到了哪些教训?

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8条评论

  1. 2017年10月16日上午4:52

    可以固定在前往成像仪的途中的凝胶。我努力了。而且我度过了愉快的时光。

    • 2020年3月6日上午12:20

      哈哈,只需用水冲洗凝胶,就可以了

  2. Parichehr 2017年6月20日下午4:39

    你好

    我对电泳有一个奇怪的问题,在电泳过程中,带状泳道消失在井附近的琼脂糖凝胶上,看来它们粘在那里并消失了,最后我看到了没有任何染料和痕迹的干净凝胶。
    我改变了力量,坦克和缓冲区。我想琼脂糖有些问题。但是,几个月前,这包琼脂糖粉还可以吗?
    谢谢

    • 阿曼达·韦尔奇博士 2017年6月22日下午12:13

      我的第一个想法是装载染料。当我遇到这个问题时,我的负载染料被某种蛋白质污染了。你把它切换了吗?

  3. 帕特·阿伯(Pat Arbour) 2017年2月17日下午5:23

    一个惊慌失措的学生工人叫我回到凝胶区域……我看了他的凝胶,从中间,向外融化,蒸汽升起(凝胶的所有边界仍然凝结了……但不久了)。尽管有将近40年的凝胶,但我还是在电源上检查了运行的电气参数,这对我来说是一种新的体验。是的,一个问题。显然,凝胶正确地制成,但使用的缓冲液是5倍库存。Student had neglected to dilute, as per written instructions ( AND, of course, hands on demos , when he was trained)…..He hadn’t bothered to check the voltage nor amperage ,either , when starting the run, also in the instructions…I guess he felt that was a waste of a precious 3 seconds of time ?
    我肯定认为,在实验室的几十年中,我已经使人类的所有错误成为可能……我错了。哈哈!为我自己和学生参与的学习经验。

  4. 凯瑟琳 2017年1月5日晚上8:47

    如果您意识到跑步跑步忘记了溴化乙二醇,也可以将其添加到凝胶的底部。由于收费,它将运行样品的相反方向。它看起来不漂亮,但是您可以看到样品。

  5. tzar-ina 2013年5月16日上午10:39

    我只是这样做的,使我的凝胶在水中,忘了添加泰式缓冲液。因为我意识到自己做了什么后立即阅读了这篇文章,所以我停止了电泳,是的,我的凝胶确实融化了一点,但是值得庆幸的是,我的样本仍然在那里。我甚至可以使用凝胶纯化套件营救它吗?

    • 尼克·奥斯瓦尔德 2013年5月16日下午3:20

      您应该使用凝胶纯化套件……好运!

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