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组织嵌入和切片:洗澡时需要思考的问题。

组织嵌入和切片:洗澡时需要思考的问题。

以同样的方式'在你修复之前思考',嵌入介质的选择应由您所需的端点决定。其基本原理是将组织加工成埋入介质,使组织变硬,并提供支持,保护组织免受与切片相关的机械力的影响。

帕尔马火腿和牛排

一个简单的(和美味!)比较是考虑从新鲜牛排切割薄片,并比较从帕尔马火腿切割薄片。当帕尔马火腿切片时,由于组织(主要)通过空气干燥来保护和硬化组织来加工从帕尔马火腿切片。用于切片的组织是一种类似的过程,除了产生微米而不是毫米薄部分,我们通常需要提供一种支撑介质,例如石蜡或塑料。

非常多才多艺

福尔马林固定石蜡包埋(FFPE)和IHC-P是大量与组织探测技术(如免疫组化和原位杂交)相关的出版物和产品描述的同义词。FFPE样品是一种非常通用的方法,用于观察组织切片内细胞的形态外观。FFPE提供了一种制作薄片的方法(通常在熟练的手下可以达到2µm),这种薄片具有良好的形态和化学保存。

抗体的崛起

FFPE还为获取细胞和组织成分空间分布的重要形态学信息提供了一个很好的折衷方案。最重要的是,这种技术可以很好地保存蛋白质、DNA和RNA,因此可以应用于广泛的分子组织探测技术。仅在过去十年中,用于诊断和研究应用以及识别生物标志物的抗体数量就出现了显著增长。这种增长只是加强了FFPE的受欢迎程度,很难想象它会被取代。

越硬,切得越薄!

支撑介质越硬,可以切割部分的较薄。较薄的部分通常与改善的形态(但是减少的化学反应性)相关。环氧树脂提供高度的形态保护程度,但组织探测和染色的机会有限。然而,可以使用不同的添加剂(例如二丁基苯二甲酸酯)来控制环氧树脂的性质,以使其更加容易地进行树脂并产生用于光学显微镜的半薄截面(〜0.5-1μm)。为了生产用于电子显微镜检查的超薄部分,将使用更易于配方。各种树脂配方可用于赋予某种形式的组织探测和染色,但没有具有FFPE的多功能性和易用性。诸如甲基丙烯酸酯的硬质树脂可用于嵌入加工后的骨样品,并且可以在没有对重型微型型微型液体上进行脱钙的情况下切片。
冷冻切片的主要优点是,组织处于接近自然的状态,可能适合显示敏感抗原,尽管形态有所损害。这两个属性很好地演示的脂肪和脂质提取通常会在处理成石蜡或某些树脂和塑料,但同样的原则适用于组织硬化(通过冷冻和冷冻保存在蔗糖)允许薄片。这里的主要区别是切片在接触切片刀时会融化,并且可以自由漂浮处理,最大的优点是可以用良好的化学保存来制作更厚的切片。它对观察大脑部分的神经特别有用。缺点是手动处理自由浮动部分可以是麻烦的处理滑动安装部分。

那一团是什么?

冷冻切片可以被认为是在树脂光谱的另一端,因为组织仍然很软,可以产生厚的切片,但柔软意味着切片通常不能支持自己作为一个切片,相反,它会变成一个无法辨认的小块,只有当它被提起到水浴中,它才会浮出来,露出它真正的形状。由于所涉及的处理过程很小,这些切片可以非常敏感地通过免疫组化或免疫荧光检测蛋白质。

嵌入/支持介质 优势 缺点
石蜡 多才多艺的。良好的保存形态,蛋白质,DNA和RNA。 不多!不能真正生产薄于2μm的部分。
环氧树脂 良好的形态保存。可以生产超薄部分。 有限的组织探测和染色。
冷冻 接近自然状态的组织。非常敏感的蛋白质检测IHC/IF。 有些破坏形态。很难处理自由浮动部分。

虽然不是一个确定的规则,硬埋植介质与良好的保存和较低的化学活性相关,而软埋植介质则相反。石蜡相当硬(但不是太硬),当然可以用分子探测技术或经验染色法来显示许多细胞和组织成分。

…和放松!

当不把组织样本埋在石蜡里时,我们喜欢添加一些其他的东西——一个灯芯,一些气味,一个点火源,一些葡萄酒,巧克力,一个热水浴,柔和的灯光,一个朋友(如果你幸运的话!)和.......在实验室辛苦一天后放松一下.....有什么不喜欢石蜡的!

您想了解更多关于这些技术的信息吗?请告诉我们。

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