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组织嵌入和切片:在浴室里思考的东西。

组织嵌入和切片:在浴室里思考的东西。

以同样的方式'在修复之前想想',嵌入媒体的选择应由所需的终点决定。基本原理是通过将组织加工成嵌入介质,使组织硬化并提供保护它免受与切片相关的机械力保护。

帕尔马火腿和牛排

一个简单的(而且美味的!)比较就是把新鲜牛排切成薄片,和把帕尔玛火腿切成薄片做比较。当然,将帕尔玛火腿切成薄片要容易得多,因为组织(主要是肌肉)经过风干处理,以保存和硬化组织。为切片准备组织是一个类似的过程,不同的是,为了生产微米而不是毫米的薄片,我们通常还需要提供支持介质,如石蜡或塑料。

非常多才多艺

福尔马林固定石蜡包埋(FFPE)和IHC-P是大量出版物的同义词和与组织探测技术相关的产品描述,例如免疫组织化学和原位杂交。FFPE样品是一种极其多功能的方法,用于观察组织切片内细胞的形态外观。FFPE提供了一种生产薄片的方法(通常在技术人员中为2μm),其提供良好的形态和化学保存。

抗体的崛起

FFPE也为获得细胞和组织成分空间分布的重要形态信息提供了很好的折衷。最重要的是,这种技术可以很好地保存蛋白质、DNA和RNA,从而适用于广泛的分子组织探测技术。仅在过去的十年里,用于诊断和研究应用以及鉴定的抗体数量就急剧增加生物标志物.这样的增长只会加强FFPE的受欢迎程度,很难想象它会被取代。

他们越难,他们切割的薄薄!

支撑介质越硬,可切割的截面越薄。薄的切片通常与改善的形态(但降低了化学反应性)有关。环氧树脂提供高度的形态保存,但有限的机会,组织探索和染色。然而,环氧树脂的性能可以通过使用不同的添加剂(如邻苯二甲酸二丁酯)来控制,使树脂软化,使其更容易被切割并产生用于光镜的半薄片(~0.5-µm)。为了生产用于电子显微镜检查的超薄薄片,将使用较硬的配方。各种各样的树脂配方都可以用于某些形式的组织探测和染色,但没有一种具有FFPE的通用性和易用性。硬树脂如甲基丙烯酸酯可用于嵌入加工过的骨样品,并可在重型切片机上进行切片而不脱钙。
低温恒温部分的主要优点是组织处于近乎自然状态,并且可以适合于敏感抗原的演示,尽管具有稍微受损的形态。这两个性质都很好地向脂肪和脂质的演示提供良好,这通常会在加工过程中通常被提取成石蜡或某些树脂和塑料,但是该原理占据了组织的硬化(通过在蔗糖中冷冻和冷冻保存)来允许要生产的薄部分。这里的主要区别在于,切片与切片机刀接触并处理自由浮动,很大的优点是可以用良好的化学保存制成更厚的部分。它特别适用于在大脑切片中的神经中进行神经。缺点是,与处理滑动安装部分相比,手动处理自由浮动部分可以麻烦。

那是什么样的?

Freezing microtome sections could be considered to be at the opposite end of the spectrum from resin, in that the tissue is still pretty soft, enabling thick sections to be produced, but the softness means that the section normally can’t support itself as a section, instead it concertinas up into a unrecognisable blob that only when lifted into a water bath can it float out and reveal its true shape. Because of the minimal processing involved, these sections can be very sensitive for looking at the detection of proteins by immunohistochemistry or immunfluorescence.

嵌入/支持媒体 好处 缺点
石蜡 多才多艺的。良好的形态保存,蛋白质,DNA和RNA。 没有多少!不能真正生产比2 μ m更薄的切片。
环氧树脂 形态保存良好。可生产超薄切片。 有限的组织探测和染色。
低温 近自然的组织状态。对IHC / IF的蛋白质检测非常敏感。 有些受损的形态。难以处理自由浮动部分。

虽然不是最终规则,但硬嵌入介质与良好的保存和更低的化学活动相关,而软嵌入介质是相反的。石蜡蜡非常坚硬(但不是太硬),并且当然允许使用分子探测技术或经验染色方法来证明许多细胞和组织成分。

......放松!

When not embedding tissue samples in paraffin wax, we like to add some other extras- a wick, some scent, a source of ignition, some wine, chocolates, a hot bath, subdued lighting, a friend (If you’re lucky!) and…….relax after a hard day in the lab…..what is there not to like about paraffin wax!

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