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免疫组织化学 - PAP,APPAP和三明治!

您会给我一个(酶促的)复合物!

跟随第1部分在本文中,让我们从看看两种最受欢迎​​的酶“三明治”方法开始。

  1. 过氧化物酶抗过氧化物酶法(PAP)。PAP方法是我使用并涉及三个主要阶段的第一种三明治方法 - 初级抗体,二抗和PAP复合物的应用。尽管PAP方法脱离了青睐,但如今仍广泛使用三明治方法。PAP是一种抗体HRP复合物,可增加可用于检测一抗原代抗体的酶(HRP)的量。这给它带来了比直接和间接方法更高的灵敏度,并且在诊断免疫组织化学中广泛使用。但是,这是一种稍微僵化的方法,因为只能利用HRP底物,例如DAB(Brown)或AEC(红色)。
  2. 碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶法(APPAP)。APPAP是PAP方法的伴侣,允许使用不同的碱性磷酸酶底物,因此使用了不同的彩色终点。在PAP和APAAP中,次级都是初级和酶复合物之间的联系。例如,如果主要是兔子,则PAP复合物也将从兔子中抬起,然后接头是抗兔(例如山羊抗兔)。
    在他们的那一天,PAP和APAAP检测非常敏感。为了进一步推动检测的敏感性,研究人员研究了在检测系统中获得更多酶以增加有色底物反应强度的不同方法。这包括通过重新应用接头和PAP(或APAAP)复合物多次重复应用检测系统的重复应用,尽管这可以提高灵敏度,但背景水平也倾向于增加。另一个修改是使用标记的次级和PAP或APAAP复合物,唯一的目的是将更多的酶进入检测系统。

领先于您的比赛

我认为,了解不同的检测系统以及如何应用它们可以使您的研究优势比竞争。通过了解原理,您可以应用或调整检测系统以满足您的直接目标或实验室中可用的试剂。

尽管您在研究中可能永远不会使用PAP方法,但您可能会使用带有现代聚合物检测的三明治方法。通常这是两个步骤,例如主要接合聚合物,通过使用适当的链接抗体可以提高它们的柔韧性和多功能性(假设您知道哪些物种专有聚合物在其中提高)。

了解成分…

敏感性不仅来自抗体试剂,而且荧光色素和底物的选择也可以有助于敏感性,固定,组织制备和抗原检索也会有助于敏感性。这有点像烹饪 - 通过了解您的食材和食谱,您可以在缺少成分时适应和修改以生产不同的菜肴或补偿。

…使三明治更美味!

经典的奶酪三明治食谱(面包/奶酪/面包)和经典的免疫三明治(兔子/山羊/兔子或初级/链接/第三纪)非常相似,但是如果您了解食谱或原理,并且可以使用其他成分或试剂,那么选项变得无限。

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1条评论

  1. mirna 2016年6月12日下午3:27

    请程序

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