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免疫组织化学 - PAP,APPAP和SINDWICHES!

免疫组织化学 -  PAP,APPAP和SINDWICHES!

你会给我一个(酶)复杂!

接下来第1部分在这篇文章中,让我们开始看看两种最受欢迎​​的酶的“三明治”方法;

  1. 过氧化物酶抗过氧化物酶方法(PAP)。PAP方法是我使用的第一种三明治方法,涉及三个主要阶段 - 施用一抗,二抗和PAP复合物。三明治方法今天仍然广泛使用,虽然PAP方法失控了。PAP是抗体-HRP复合物,其增加可用于检测一抗酶的酶量(HRP)。这使得比直接和间接方法更大的灵敏度,并且在诊断免疫组化中广泛使用。然而,它是一种略微不灵活的方法,只能利用诸如DAB(棕色)或AEC(红色)的HRP底物。
  2. 碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶方法(APPAP)。APPAP是PAP方法的伴侣,其允许使用不同的碱性磷酸酶基材并因此使用不同的彩色终点。在PAP和APAAP中,继发是初级和酶联之间的联系。例如,如果初级是兔子,则PAP复合物也将从兔子提出,然后将接头将是抗兔(例如山羊抗兔)。
    在他们的日子里,PAP和APAAP检测非常敏感。为了进一步推动检测的灵敏度,研究人员看着不同的方法可以在检测系统中获得更多酶以增加有色基材反应的强度。这包括通过几次重新施加链接器和PAP(或APAAP)复合物来重复应用检测系统,虽然这可以提高灵敏度,但背景水平也趋于增加。另一个修改是使用标记的次级,然后使用PAP或APAAP复合体,再次唯一的目的是将更多酶进入检测系统。

领先于您的竞争对手

在我看来,获得对不同的检测系统以及如何应用的理解可以将您的研究提供对您的竞争对手的优势。通过了解您可以应用或适应检测系统以满足您的立即目标或实验室中可用的试剂。

虽然您可能永远不会在研究中使用PAP方法,但您可能会使用具有现代聚合物检测的三明治法。通常这些是两步程序,例如主要是聚合物,它们可以通过使用适当的连接抗体来改善它们的柔韧性和通用性(假设您知道含量的物种专有的聚合物)。

了解成分......

敏感性不仅来自抗体试剂,荧光染料和底物的选择也可以有助于敏感性,如固定,组织制备和抗原检索。它有点像烹饪 - 通过了解您的成分和食谱,您可以调整和修改以产生不同的菜肴或在缺少成分时补偿。

......让你的三明治更美味!

经典的奶酪三明治配方(面包/奶酪/面包)和经典免疫夹心(兔子/山羊/兔子或主要/链接/第三)非常相似,但如果您了解配方或原则,并且可以使用其他成分或试剂然后是您的选项变得无限制。

1条评论

  1. miRNA. 2016年6月12日在下午3:27

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