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组织学固定剂:什么做他们实际上做您的样品?

我们都使用某种固定的在组织学实验室,但我们确实知道它在做什么我们的细胞和组织?不管是什么固定液我们使用,目的是为了固定抗原和留住优秀的细胞结构,使我们能够做一些组织学分析。

Optomize的协议

通常我们为了做免疫组化,让我们使用抗体来研究我们的组织样本做固定。因为不同的抗原表位需要不同的固定技术等,这又是一个需要优化的另一个方法固定的整个过程可能会有问题。

这里是一个简短的指南什么两个我们使用的主要的固定剂的发生在我们的样本:PFA和布安的解决方案。

PFA

修桥...

究竟什么是PFA?PFA(多聚甲醛或)为甲醛的缩合产物,其是水溶性的,无色的和有毒气体。甲醛作为固定剂,因为它与蛋白上的伯胺,以形成被称为“亚甲基桥”交联反应。

...稳定和维护。

PFA添加到碱性氨基酸的侧链,并用于稳定蛋白质和蜜饯形态肽键的酰胺氮原子。虽然这是一个迅速穿透固定,其交联蛋白质非常缓慢,往往需要长达一周的时间来实现固定的良好水平。因此,与PFA的最常见的问题之一是下固定。组织的小件最好应沉浸在PFA至少24小时的保存完好程度。较大的组织,如人类活检样本,可能需要高达PFA几周来实现充分固定。

屏蔽和隐藏

由于该蛋白质交联的过程中固定的形成,抗原位点可以被掩盖其能够防止识别抗原由抗体。这可以通过在免疫组化前协议的抗原修复工序中添加来克服。这可以是通过热或化学诱导方法。这两种方法打破了亚甲基桥暴露抗原位点的抗体。

布安的解决方案

苦味酸使得黄色

布安氏固定剂是化合物的混合物,由甲醛,苦味酸和乙酸。每个组件具有补充了其它的特定功能。甲醛的功能,交联蛋白,上面所讨论的。在该溶液中的苦味酸的作用是通过形成具有碱性蛋白盐缓慢渗透到蛋白质的组织和凝析。这可以,但是,导致组织的一些收缩。苦味酸是Bouin氏溶液的成分,在特性黄色结果。

适合睾丸,不是血!

相反,乙酸正迅速穿透,并且使组织,这部分抵消造成的苦味酸收缩的一些肿胀。乙酸引起的核酸凝结和需要染色体保存经常被使用。这使得如果减数分裂染色体的可视化寻求其在睾丸的固定是特别有用的。如果你有兴趣在红细胞虽然,这是不是你的固定;乙酸裂解红血细胞并溶解小的铁和钙沉积。在这种情况下使用某种形式的甲醛的单独会更好。

避免自体荧光

布安的解决方案是为苏木和伊红染色特别好的固定,因为它保留了形态的细节非常好。它比PFA更好的用于固定大型组织,其中形态的保护是非常重要的,但是,它不是免疫的最佳选择,因为苦味酸的自发荧光。

要小心它

为Bouin氏溶液的标准固定协议灌注,随后浸入或浸没单独为至少6小时。大型标本可以保存在布安的时间更长,可能长达三天,虽然它取决于组织。由于布安的解决方案的组件的有毒性质,适当的安全应采取预防措施。特别是,苦味酸可爆,并应采取适当的如此处置措施。

更多的固定剂,更多的选择

固定不局限于这两个方案的任何方式。还有,我们每天都在使用,如甲醇,丙酮,glutaradleyde和许多其他许多固定剂。的选择取决于起始的细胞或组织并且还可以应用该技术。正如我如上所述,一些固定剂是用于荧光或组织学分析优于其它。由于通常是在组织学的情况下,试错打在寻找工作的最好的一个重要组成部分。

1条评论

  1. 先生Lisesi B.M 在2019 4月24日上午11:09

    它的帮助文件,,,,,如果可能的话,你可以准备协议指南不同的固定剂,以促进您的文档。

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