跳到内容

组织学中的荧光咪唑:多重分子组织探测的多功能方法。

组织学中的荧光咪唑:多重分子组织探测的多功能方法。

如果您是使用荧光染色的细胞和组织切片的研究人员,您应该认真考虑使用酪酰胺试剂。为什么?嗯,因为它们可以具有精致的灵敏度,易于使用,多功能,并且在管道中存在增加的荧光团。当它们依赖于过氧化物酶催化的可视化过程时,它们很容易集成到已建立的过氧化物酶检测方案中。此外,它们具有在更稀释的抗体浓度下工作并具有改善的敏感性的优点。我们已经用它们成功地检测蛋白质(免疫组织化学和免疫荧光)和mRNA('rnascope')。

没有思酰胺,我们会做什么?

我们在爱丁堡大学内运行了多用户,多学科核心研究(冲浪)。酪酰胺试剂经常在设施内使用 - 事实上,由于他们的令人厌恶,它们是一个关键试剂,因为它们是“标准化”的多种和相同物种分层和复用实验(蛋白质和mRNA)。点击这一点关联要了解有关可用的Tyramide产品的更多信息。

没有交叉反应

ZsuzsannaTóth和éva·梅泽发现了一个独特的Tyramides的财产,并在2007年在组织化学和细胞化学杂志中报道(点击这里对于文章)。Toth和Mazey证明,在温和的热诱导的表位检索步骤中除去来自细胞或组织切片的先前结合的抗体,甲酰胺将保持与感兴趣的目标。这消除了抗体试剂在多重分层化研究中彼此反应的风险,并给出假阳性分层化结果。

相同的物种?没关系

原则上,这意味着已经在相同物种中饲养的抗体可以容易地用于分层化实验中,并且可以利用传统的HRP缀合的诸如STREMPAVIDIN HRP和聚合物来推动灵敏度。我们手中的另一个优点是我们能够使用配备有机载抗原检索能力的免疫染色机器人自动化该染色程序 - 如果要将多路复用免疫荧光染色被传送到多个用户作为服务,则可以实现相当大的优势。

可能性是无止境

在我们的多用户组织工具中,使用基于直接,间接或链霉抗生物素蛋白的检测的传统组合,为我们的研究人员开发多重协议非常困难。这种方法需要放养大量抗体和检测系统,以适应我们需要解决的大量可能的排列。我们有大量的用户有兴趣使用来自各种物种的各种组织,当然,每个人想要使用的主要抗体也来自另一个不同的种类 - 可能性是无穷无尽的!!

需要考虑我们的用户的因素;

  • 选择次生抗体。是否合适地交叉被吸收,使其不会与检测系统中的目标组织或其他抗体交叉?
  • 检测系统是否适合检测低丰度靶蛋白的敏感性?
  • 我们需要履行哪些控件来保证“共同定位”是真实的,而不是不恰当的试剂交叉反应和给予错误共同定位的人工制品?

使用基于标准化的基于巨酰胺的检测和共聚焦显微镜具有多跟踪能力,我们能够标准化协议并经常可视化四到五种颜色。

多少?!!

通过在成像时使用光谱解混,并且随着新的酪酰胺试剂的可用性,甚至可以进一步推动该数量。在一个最近的出版物,Gerdes和同事使用荧光Cy染料的化学灭活后迭代染色,并在精确注册基准点的顺序成像。这使它们能够在单个FFPE部分中检测61种不同的蛋白质表位!六十一!

未来很明亮

用过氧化物酶标记的一抗,随后是这种类型的荧光标记的酪酰胺,可能导致甚至更大的敏感性并允许在直接荧光检测的检测极限下表达的蛋白质的可视化。关注此空间!

参考

Tóth和Mezey(2007)使用来自相同物种的抗体同时可视化多种抗原的酪酰胺信号扩增。J Histochem Cytochem 55:545-554。

杰尔德。,(2013)福尔马林固定,石蜡包埋癌组织的高度复用单细胞分析。PNA 110:11982-11987。

本文是由Mike Millar和Shelia Macpherson-两纳纳的组织学与冲浪装置!!

你可以下载冲浪手册这里

发表评论

你一定是登录发表评论。

本网站使用AkisMet减少垃圾邮件。了解如何处理评论数据

滚动到顶部
分享Via
复制链接