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避免这些陷阱:七(不是那么致命)的组织学罪

一个女孩环绕着陷阱来表示避免组织学错误

获取实验正确的意味着了解可能出错的是什么以及如何避免它。准备组织学幻灯片需要时间和精力,所以你不想因为一个可避免的错误而不得不重做它们。

本文突出了七个常见的组织学错误,我个人见证了(据说是聪明和其他优秀的)科学家的提交。

阅读,了解如何在替补席上避免使这些常见的组织学错误。

7常见的组织学犯错误

1.让样品变干

在脱碱化和再水化幻灯片后,您的样品将保持水合。未能这样做可以导致非特异性抗体结合和高背景信号。因此,如果您还没有准备好使用再水化幻灯片将您的幻灯片孵育在封闭的容器中填充1x缓冲区,直到您准备好继续使用染色协议。

理想情况下,所有孵化都应通过完全淹没幻灯片来完成。但这并不实用。相反,当使用昂贵的试剂(例如抗体)时,您只能占用足够的解决方案,以覆盖幻灯片上的样品。

如果您被迫使用低卷的解决方案,请采取以下预防措施以防止样品意外地干燥:

使用蜡笔或蜡笔

用蜡蜡笔或铅笔追踪样品周围的圆圈将防止您的解决方案意外地耗尽幻灯片,并保持组织覆盖和水合良好。

使用湿度室

当执行更长的孵化(10分钟或更长时间)时,请务必将您的载玻片孵育在湿度室中。这将阻止您的解决方案变得过于浓缩,甚至更差,完全干燥。您可以购买一个花哨的湿度室,或自己制作。

为了让自己的湿度腔室,您需要的是一个干净的塑料容器,带盖子,一些湿纸巾,以及留下幻灯片的东西(例如,您可以切割的一次性塑料10 ml移液管安装以适合容器)。

2.用笔标记幻灯片

这个错误让我想起了一个旧的笑话:

“你知道美国宇航局花了800万美元开发一支可以在太空中写的笔吗?它花了两年,但他们做到了。“宇航员笔”可以在零重力,甚至水下写下来。俄罗斯人使用铅笔。“

就像俄罗斯人一样:用铅笔。在许多组织学协议中需要的一系列乙醇和二甲苯洗涤后,甚至含酒精的笔也会褪色。

拯救自己的心痛,跳过笔(无论是花哨的),始终使用铅笔标记幻灯片。

3.使用叠氮化钠

叠氮化钠是含有抑菌剂,其通常加入缓冲液以延长其保质期。通常,良好的做法是将叠氮化钠添加到PBS或TBE缓冲液中。

然而,如果您计划使用辣根过氧化物酶(HRP)共轭抗体,您不应将叠氮化钠加入缓冲液中。

HRP通过与基材温育时沉淀着色产品,通常产生局部染色,通常是二氨基苯甲酸(DAB)。但是,如果将叠氮化钠放入缓冲液中,辣根过氧化物酶将与叠氮化钠反应。

该反应产生亚氮基,使HRP失活,并且缓冲液中叠氮化钠将防止HRP驱动的颜色沉积,并导致差(或不)染色。

如果您担心将叠氮化钠从缓冲区中留出来会缩短其保质期,您可以采取一些预防措施:

  1. 每当您使用组织学缓冲区时,请使用无菌移液技术。
  2. 将缓冲区存放在冰箱中。
  3. 组成较小的缓冲液或等分的批次进入单独的无菌容器。

4.没有设置计时器

很容易被抓住回答电子邮件,与同事聊天,或检查Facebook(好像你会在工作中做这样的事情!)。设置您的计时器每次,并确保您将其保留在您身上。

5.使用错误的盖玻片

您是否知道盖玻片或盖玻片的厚度众多?直到我的4岁直到我TH.研究生院。好吧,他们确实如此,它至少在高放大率上。因此,在随便抵碎覆盖物的盖子实验室之前,确保它是所选显微镜的正确厚度。

盖玻片有各种厚度标记为#0-#4(表1),更昂贵(更厚)并不总是更好。如果您不使用最佳尺寸的盖板,您将无法为您提供最佳分辨率显微镜目标

表格1。盖玻片厚度指南。

数字 厚度(mm)
0. 0.08 - 0.13
1 0.13 - 0.16
1.5 0.16 - 0.19
2 0.19 - 0.25
3. 0.25 - 0.35
4. 0.43 - 0.64

大多数显微镜目的具有最佳的盖玻片厚度刻在它们上。对于许多目标,最佳厚度为0.17毫米。

但是,#1不是#1.5盖玻片是最常见的。这是因为在计算最佳的“盖玻片厚度”时,还必须考虑安装介质的厚度。

因此,盖板盖板加上几毫米的安装介质等于最常见的理想厚度为0.17毫米。但是在使用盖玻片之前,您应该始终检查您的目标的要求。

笔记:一些高级目标具有纠正套环,可弥补各种盖玻片厚度。

6.使用10x缓冲区

如果您使用别人的缓冲区,这尤其重要。始终仔细检查您即将倒在贵重幻灯片上的缓冲区是1x缓冲区,而不是5x或10x缓冲器集中器。仅仅因为瓶子只标记为TBE,请不要假设这意味着1x TBE,始终检查。

7.穿乳胶手套

是的,我们都知道我们应该穿手套,我们大多数人都这样做,至少在真正讨厌的东西。但是你知道并非所有手套都提供相同的保护吗?我们中的许多人更喜欢乳胶手套,为我们的日常实验室活动,因为敏感度不能被殴打。

但是,在围绕有机溶剂(如二甲苯)时,您不应该使用乳胶,因为它们不提供足够的保护。

相反,使用丁腈手套,甚至更好地使用PVA或Vitron手套来正确保护自己。您可以了解有关如何选择正确的手套的更多信息我们的手套指南

你有没有牺牲任何这些组织学犯错误?让我们在评论中知道。

最初发布于2013年9月13日。审查和更新了2021年7月。

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