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看不到老鼠的鼠标?!鼠标鼠标免疫组化检测的解决方案

看不到老鼠的鼠标?!鼠标鼠标免疫组化检测的解决方案

鼠标鼠标背景下的问题只是在研究环境中工作的组技术医学家关注的原因。那些在诊断环境中工作的人可能永远不会遇到这一点,因为它们将与人类组织与在各种物种中饲养的抗体一起使用,而是一种不会使用的物种是人类!

兔子,老鼠,羊,老鼠......

然而,在研究环境中,有一个合理的机会,在某些时候,您将使用小鼠组织和小鼠抗体,并且这种组合可以导致小鼠在鼠标背景上。如何克服这个问题?在讨论解决方案之前,请注意,如果您使用兔组织和兔抗体或大鼠组织和大鼠抗体或羊组织上的羊抗体等,则可能出现相同的问题。

看不到老鼠的鼠标!

由于小鼠单克隆一抗的患病率和使用小鼠组织,现在有一系列试剂有助于克服这一挑战。出现问题发生,因为您试图检测小鼠中饲养的一抗癌的末端,对小鼠组织。此处的问题是,在某些情况下,在某些情况下施用时,次级抗体是“抗小鼠的试剂,在某些情况下与您正在使用的小鼠抗体和小鼠组织结合(即使您的方法正确优化)。这导致高背景或非特定染色。

有时它有效,有时它不会

我多年来的经验是,当这将成为一个问题时,有时候很难预测。我在小鼠组织上使用小鼠抗体具有完全可接受的染色等的情况,其中染色是完全不可接受的,诸如组织类型,固定和抗小鼠二抗的质量的因素可能都有影响在获得的结果上。

如果它是您的实验问题,现在有一系列解决方案可用于消除您不能在小鼠组织上使用小鼠抗体的神话。

这是前三个解决方案;

1.如果可能的话,使用其他物种中的主要饲养。例如,使用兔单克隆抗体正在增加,并且可以使用这些试剂检测越来越多的蛋白质靶标。

2.直接检测。使用直接共轭的小鼠初抗体。这避免了需要使用“抗鼠标”中的需要,从而解决问题。然而,这受灵敏度的限制,可用的试剂范围或要求标记您自己的抗体。

3.抗小鼠IgG F(AB)阻断试剂的用途。F(AB)片段抗体仅具有一种抗原结合位点。它们是由蛋白酶消化的整个IgG分子消化,并且从Fc片段纯化切割的F(AB)片段。它们可从一系列供应商提供直接标记(具有检测试剂)或未标记为阻塞试剂。杰克逊免疫研究Abcam.有合适的试剂。

程序示例

我建议的程序将是将在与检测的次生抗体相同的物种中提出的未标记的抗小鼠F(AB)的部分孵育。The theory is that the unlabelled anti-mouse F(ab) reagent will bind to the mouse tissue only therefore blocking the ability of the chosen anti-mouse secondary to bind to the tissue (as it only has one binding site it can’t bind to the mouse primary). When you apply your mouse primary, it will bind to its protein target and the anti-mouse secondary will bind only to it and not the tissue. This can then be visualised in the usual ways.

我建议在您的协议中提出以下步骤;

  • 兔抗小鼠F(AB)
  • 鼠标小学
  • 兔抗小鼠F(AB)-HRP
  • 轻拍

看看矢量实验室网站- 他们在鼠标检测套件上有一只鼠标,它利用了这个原理。

这可以通过使用生物素化的F(AB)二次和链霉抗生物素蛋白检测来制造更敏感的敏感性(致力于生物素富含组织中的链肽蛋白检测的缺陷!)。一些制造商(例如Abcam套件生物发作)还具有鼠标上的小鼠聚合物检测系统。These are of course proprietary reagents and I can only guess at the composition, but they’re probably similar to the above example (an anti-mouse IgG F(ab) blocking reagent raised in the same species as the anti-mouse polymer reagent).

最后,有解决方案来克服这些问题,因此,是鼠标抗体可以在小鼠组织上使用!

P.S.当使用这些M-O-M检测时,我们发现在我们手中,我们通常需要使用较低(更浓缩)稀释的主要抗体,而我们将用于标准检测。

快乐染色!

图像信用:Azhar Elmiza.

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