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新英格兰生物抗体公司(NEB)成立于20世纪70年代中期,是发现和生产用于分子生物学应用的酶的行业领导者,现在为基因组研究提供最大的重组酶和天然酶选择。bob网站appNEB继续将产品范围扩展到PCR、基因表达、下一代测序样品制备、合成生物学、糖生物学、表观遗传学和RNA分析等领域。bob网站app此外,NEB还致力于加强联盟,使新技术能够进入关键市场领域,包括分子诊断技术的发展。新英格兰生物abs公司是一家私人控股公司,总部位于美国马塞诸塞州伊普斯维奇,通过独家经销商、代理商以及位于加拿大、中国、法国、德国、日本、新加坡和英国的7家子公司,在全球范围内拥有广泛的分销网络。更多关于新英格兰生物抗体的信息,请访问

氨苄青霉素的选择有什么问题?

内容由新英格兰生物学实验室

ampicillin.png在基因克隆和蛋白表达中,氨苄青霉素耐药常作为质粒的选择标记大肠杆菌和其他细菌。虽然它是一个非常有用的工具,但是在使用这个选择标记时可能会出现一些问题,如果您打算使用它,您需要注意这些问题。本文简要介绍了这些限制是什么以及如何避免它们。

氨苄青霉素的选择是如何起作用的

氨苄青霉素选择的基础是抗生素的水解和灭活的-内酰胺酶表达从质粒bla基因。问题是:大量产生的-内酰胺酶也会被细菌分泌到培养基中。如果培养处理不当,细胞外-内酰胺酶的积累会使培养基中的氨苄青霉素失活,从而消除选择压力。

在液体培养中,这意味着一部分(可能是非常大的一部分)细胞可能不再具有质粒,从而导致产生不良质粒的准备、蛋白质表达等。在琼脂板上,氨苄青霉素降解可导致卫星菌落的形成。这些是非常小的细胞集落没有携带质粒形成在一个大的集落周围的质粒已经携带bla含有质粒。人造卫星的形成是因为-内酰胺酶bla表达菌落在菌落附近降解氨苄青霉素。人造卫星并不一定是个问题,因为当它们被转移到含有新鲜氨苄青霉素的培养基上时就不会生长。

避免质粒损失

如果你注意到你的质粒前期产量不高或蛋白表达不理想,-内酰胺酶的积累可能是你的问题。那么在使用氨苄西林作为选择标记时如何避免质粒丢失呢?方法如下:

  • 不要让液体培养基浸透太久。我建议不要培养高于OD的培养基600= 3(在溶源肉汤中,也称为LB)。
  • 从发酵剂培养基中去除分泌的-内酰胺酶。这可以通过将发酵剂造粒并在新鲜的、无抗生素的培养基中重新悬浮来实现,然后再对主培养基进行无菌培养。
  • 如果您遇到问题,使用较高浓度的氨苄青霉素。我建议使用200 ?g/mL或更高。这使得-内酰胺酶更难灭活氨苄青霉素,这对避免卫星形成特别有用。
  • 不要使用旧的氨苄青霉素库存或钢板,因为氨苄青霉素会发生一定程度的分解,降低氨苄青霉素的有效浓度。更多关于如何储存和使用抗生素的信息,请阅读我们的相关文章抗菌素稳定性:保持药粉干燥
  • 如果以上方法都失败了,就改用卡宾西林。虽然这种抗生素也灭活-内酰胺酶,过程发生比氨苄青霉素慢得多。因此,选用卡宾西林要比氨苄西林有效得多。不幸的是,它要贵得多!

氨苄西林只是分子生物学中使用的各种麻醉药之一。bob网站app如果你想了解其他常用抗生素的信息,请查看我们的文章分子生物学中的抗生素bob网站app

你对使用氨苄青霉素有什么建议吗?如果是,请留下评论。

最初发表于2011年5月9日。2019年12月17日修订更新。

4评论

  1. MugeAtis 2014年9月10日下午2:51

    我有一个问题。氨苄青霉素原液(掺入醋酸乙酯和水)的臭味是抗生素去除的标志吗?过了一段时间,比如3周,我的100ug/ul液体开始有异味。我应该认真对待吗?

  2. DrKennB 2013年4月5日下午6:42

    我在液体培养中从未遇到过氨苄青霉素的问题。是的,在培养皿中氨苄西林浓度会降低这样就会有卫星菌落生长但我不认为你可以耗尽液体中的浓度到非抗性菌落生长的程度。

    知道巴克利

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