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DNA和RNA的乙醇沉淀:如何工作

啤酒瓶和马克杯的图像,表示乙醇用于乙醇沉淀

乙醇沉淀法是在水溶液中浓缩和脱盐核酸(DNA或RNA)制剂的一种常用技术。

基本的程序是盐和乙醇加入到水溶液中,迫使沉淀的核酸从溶液中出来。沉淀后,核酸可通过离心从其余溶液中分离出来。然后将颗粒在70%的冷乙醇中洗涤。在进一步的离心步骤之后,乙醇被去除,核酸颗粒被允许干燥,然后重新悬浮在一个干净的水缓冲液中。

那么它是如何工作的呢?

这一切都与溶解性有关……

首先,我们需要知道为什么核酸可溶于水中。水是一种极性分子 - 由于未分析的电子对,它具有近氧原子附近的部分负电荷,并且在氢原子附近的部分正电荷。由于这些电荷,像DNA或RNA这样的极性分子可以与水分子静电相互作用,使它们容易溶解在水中。因此,极性分子可以被描述为亲水和非极性分子,其不能容易地与水分子相互作用,是疏水的。由于带负电荷的磷酸盐(PO),核酸是亲水性的(PO3.- - - - - -)沿着糖磷酸骨干群。

盐的角色……

好的,返回协议。盐在方案中的作用是中和糖磷酸盐骨干上的电荷。常用的盐是乙酸钠。在溶液中,醋酸钠分解为Na+和[CH3.首席运营官)- - - - - -.带正电荷的钠离子中和PO上的负电荷3.- - - - - -这使得分子的亲水性大大降低,因此更不容易溶于水。

乙醇的作用…

Na之间的静电引力+离子和PO3.- - - - - -离子是由库仑的法律,它受溶液介电常数的影响。水的介电常数很高,这使得钠离子很难找到+和阿宝3.- - - - - -走到一起。另一方面,乙醇具有更低的介电常数,使NA更容易+与PO交互3.- - - - - -.这就屏蔽了它的电荷,使核酸的亲水性降低,从而导致它从溶液中脱落。

温度的作用......

在低温(例如-20°C或-80°C)下培养核酸/盐/乙醇混合物通常被认为是方案中的一个必要步骤。然而,根据Maniatis的说法等等。分子克隆,实验室手册2nd2版……nd版? ?-我需要一个更新的版本!),这是不需要的,因为浓度低至20 ng/mL的核酸会在0-4°C沉淀,所以在冰上孵育15-30分钟就足够了。

70%乙醇的洗涤步骤…

该步骤是将任何残留的盐从颗粒DNA洗净。

乙醇沉淀的几个小提示…

  • 选择的盐
    • 使用醋酸钠(0.3 M终孔,pH 5.2)用于常规DNA沉淀。
    • 使用氯化钠(0.2 M终conc),因为NaCl使SDS可溶于70%的乙醇,所以它不会与DNA沉淀。
    • 使用氯化锂(0.8 M终孔)。由于RNA沉淀需要2.5-3体积的乙醇,而LiCl在乙醇中比乙酸钠更容易溶解,因此不会沉淀。但要注意,氯离子会抑制蛋白质合成和DNA聚合酶,所以氯化锂对RNA的准备没有好处体外翻译或逆转录。在这种情况下,使用醋酸钠。
    • 使用醋酸铵(2米最终浓度)用于去除DNTPS,但不要用它来制备T4多核苷酸激酶反应的DNA,因为铵离子抑制酶。
  • 增加低浓度或小核酸片(小于100个核苷酸)的促进产率
    • 添加MgCl2最终浓度为0.01 M。
    • 离心前冰上孵育时间增加至1小时。

这种解释应该让您加快乙醇降水量的速度。如果您想了解有关乙醇降水等乙醇降水和其他DNA清理方法的更多信息,您可能想要查看这些方法......

更多关于乙醇沉淀的制品

最初发布于2007年12月4日。审查和重新发布3月2021日。

啤酒瓶和马克杯的图像,表示乙醇用于乙醇沉淀
图像信用:

154条评论

  1. 富富尔语 2021年2月16日下午5点42分

    没有乙醇怎么提取DNA ?



  2. 比约恩 2020年10月13日下午6点13分

    链接:“DNA/RNA乙醇沉淀后如何得到完美的颗粒”
    似乎死了。应该是
    //www.epocanyc.com/13513/how-to-get-a-perfect-pellet-after-dnarna-precipitation



    • 劳拉Grassie 2021年8月31日上午10点34分

      谢谢,我们现在已经修复了这个链接!



  3. rrc 2019年4月26日上午6点53分

    假设被破坏的细胞和游离的DNA在室温下被放入90ml 95%的乙醇中,你如何直接从乙醇中提取DNA ?



  4. hannnah 2018年1月17日下午5点35分

    它的coooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooloooooooooooooooooooOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOL ......但有疑问为什么DNA叫DNA



    • Halahath 2018年2月21日晚上10点25分

      脱氧核糖核酸,换句话说,DNA含有脱氧核糖,很明显,它是一种核酸。



  5. Fatemeh. 2017年5月7日下午4点20分

    非常感谢你的好文章。我们如何引用你的文章?我找不到出版日期?



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