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New England Biolabs, Inc. (NEB)成立于1970年代中期,是发现和生产用于分子生物学应用的酶的行业领导者,现在为基因组研究提供最大的重组和天然酶的选择。bob网站appNEB继续扩大其产品范围到相关领域的PCR,基因表达,样品制备下一代测序,合成生物学,糖生物学,表观遗传学和RNA分析。bob网站app此外,NEB的重点是加强联盟,使新技术能够进入关键市场部门,包括分子诊断开发。新英格兰生物实验室(New England Biolabs)是一家私人控股公司,总部位于美国马萨诸塞州伊普斯维奇(Ipswich),通过独家经销商、代理商和位于加拿大、中国、法国、德国、日本、新加坡和英国的七家子公司在全球范围内拥有广泛的分销网络。更多关于新英格兰生物实验室的信息请访问

乙醇沉淀DNA和RNA:它是如何工作的

内容赞助新英格兰Biolabs.

用于乙醇沉淀的啤酒瓶和啤酒杯的图像

乙醇沉淀是一种在水溶液中用于浓缩和去盐的核酸(DNA或RNA)制剂的常用技术。

最基本的程序就是盐和乙醇加入水溶液中,使核酸沉淀出溶液。沉淀后,通过离心将核酸从溶液中分离出来。小球然后用70%的冷乙醇洗涤。在进一步离心步骤后,将乙醇移除,并使核酸颗粒干燥,然后在干净的水缓冲液中重悬。

那么这是怎么做到的呢?

这都是关于溶解度…

首先,我们需要知道为什么核酸可溶于水中。水是一种极性分子 - 由于未分析的电子对,它具有近氧原子附近的部分负电荷,并且在氢原子附近的部分正电荷。由于这些电荷,像DNA或RNA这样的极性分子可以与水分子静电相互作用,使它们容易溶解在水中。因此,极性分子可以被描述为亲水和非极性分子,其不能容易地与水分子相互作用,是疏水的。由于带负电荷的磷酸盐(PO),核酸是亲水性的(PO3.- - - - - -)沿着糖磷酸骨干群。

盐的作用…

好的,返回协议。盐在方案中的作用是中和糖磷酸盐骨干上的电荷。常用的盐是乙酸钠。在溶液中,醋酸钠分解为Na+[ch.3.首席运营官)- - - - - -。带正电荷的钠离子中和了PO上的负电荷3.- - - - - -在核酸上的组,使分子远低于亲水性,因此易溶于水。

乙醇的作用…

Na之间的静电吸引+溶液中的离子和PO3.- - - - - -离子由库仑的法律,受溶液介电常数的影响。水的介电常数很高,这使得钠离子的介电常数相当高+和阿宝3.- - - - - -走到一起。另一方面,乙醇具有更低的介电常数,使NA更容易+与PO互动3.- - - - - -。这屏蔽了它的电荷,使核酸不那么亲水,从而使它从溶液中脱落。

温度的作用......

在低温(例如-20°或-80°C)下培养核酸/盐/乙醇混合物,通常被认为是方案中的一个必要步骤。然而,根据Maniatis的说法等等。分子克隆,实验室手册2n2版……n版? ?-我需要一个更新的版本!),这是不需要的,因为核酸浓度低至20 ng/mL会在0-4℃沉淀,所以在冰上孵育15-30分钟就足够了。

使用70%乙醇的清洗步骤…

该步骤是将任何残留的盐从颗粒DNA洗净。

乙醇沉淀的几个提示…

  • 选择的盐
    • 使用醋酸钠(0.3 M最终conc, pH 5.2)用于常规DNA沉淀。
    • 使用氯化钠(0.2 M最终conc)对于含有SDS的DNA样品,因为NaCl使SDS溶于70%的乙醇,所以它不会与DNA一起沉淀。
    • 使用氯化锂(0.8 M最终conc)。由于RNA沉淀需要2.5-3体积的乙醇,而LiCl在乙醇中比乙酸钠更容易溶解,因此不会沉淀。但是要注意,氯离子会抑制蛋白质合成和DNA聚合酶,所以LiCl对RNA准备是不利的体外翻译或反转录。在这些情况下,使用醋酸钠。
    • 使用醋酸铵(2米最终浓度)用于去除DNTPS,但不要用它来制备T4多核苷酸激酶反应的DNA,因为铵离子抑制酶。
  • 增加低浓度或小核酸片(小于100个核苷酸)的促进产率
    • 添加MgCl2最终浓度为0.01 M。
    • 在离心前增加冰培养时间至1小时。

这种解释应该让您加快乙醇降水量的速度。如果您想了解有关乙醇降水等乙醇降水和其他DNA清理方法的更多信息,您可能想要查看这些方法......

更多关于乙醇沉淀的制品

最初发布于2007年12月4日。审查和重新发布3月2021日。

用于乙醇沉淀的啤酒瓶和啤酒杯的图像
图像信用:

150评论

  1. rrc 2019年4月26日6:53

    让我们说,在室温下将破坏的细胞和细胞和细胞免DNA置于90ml 95%乙醇中,您将如何直接从乙醇中提取DNA?



  2. 汉娜 2018年1月17日下午5:35

    它的coooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooloooooooooooooooooooOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOL ......但有疑问为什么DNA叫DNA



    • Halahath 2018年2月21日晚上10:25

      脱氧核糖核酸,换句话说,DNA含有脱氧核糖,很明显,它是一种核酸。



  3. Fatemeh. 2017年5月7日下午4:20

    非常感谢你的好文章。我们如何引用你的文章?我找不到公布的日期?



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