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DNA和RNA的乙醇沉淀:如何工作

啤酒瓶和杯子的图像,表示用于乙醇沉淀的乙醇

乙醇沉淀是一种在水溶液中浓缩和去盐的核酸(DNA或RNA)制剂的常用技术。

基本过程是盐和乙醇将其添加到水溶液中,该水溶液迫使核酸的沉淀从溶液中脱离。沉淀后,可以通过离心将核酸与其余溶液分离。然后将沉淀在冷70%乙醇中洗涤。在进行进一步的离心步骤之后,除去乙醇并允许核酸沉淀在干净的水缓冲液中重悬之前干燥。

那么这是如何工作的呢?

这一切都与溶解度有关…

首先,我们需要知道为什么核酸可溶于水。水是极性分子 - 由于电子对,它在氧原子附近具有部分负电荷,并且在氢原子附近的部分正电荷。由于这些电荷,诸如DNA或RNA之类的极性分子可以与水分子静电相互作用,从而使它们很容易溶于水中。因此,极性分子可以描述为疏水性的亲水性分子和非极性分子(不容易与水分子相互作用)。核酸是由于带电负电的磷酸盐(PO)而具有亲水性的(PO3-)沿糖磷酸主链的组。

盐的作用…

好的,回到协议。盐在协议中的作用是中和糖磷酸骨架上的电荷。常用的盐是乙酸钠。在溶液中,乙酸钠分解为Na+和[ch3COO]-。带正电荷的钠离子中和PO上的负电荷3-核酸上的基团,使分子的亲水性要少得多,因此在水中溶于水。

乙醇的作用…

NA之间的静电吸引力+解决方案和PO的离子3-离子由库仑定律,它受溶液的介电常数的影响。水具有高介电常数,这使得NA相当困难+和po3-聚在一起。另一方面,乙醇的介电常数要低得多,使Na变得容易得多+与PO互动3-。这会屏蔽其电荷并使核酸降低亲水性,从而导致其退出溶液。

温度的作用…

通常将核酸/盐/乙醇混合物在低温(例如–20°或–80°C)下孵育,通常被认为是方案中必要的步骤。但是,据马尼蒂斯说等。(分子克隆,实验室手册2nd版本…2nd版??- 我需要获得一个较新的版本!),这是不需要的,因为低至20 ng/ml的浓度下的核酸会在0-4°C下沉淀,因此在冰上孵育15-30分钟就足够了。

用70%乙醇的洗涤步骤…

此步骤是将任何残留盐从颗粒的DNA上洗净。

一些有关乙醇降水的技巧…

  • 选择盐
    • 利用乙酸钠(0.3 m最终浓度,pH 5.2)用于常规DNA沉淀。
    • 利用氯化钠(0.2 m最终浓度)对于含有SDS的DNA样品,因为NaCL可将SDS溶于70%乙醇中,因此它不会与DNA沉淀。
    • 利用氯化锂RNA(0.8 m最终浓缩)。由于RNA沉淀需要2.5–3卷乙醇,而LICL比乙酸钠更溶于乙醇,因此不会沉淀。但是要当心 - 氯离子会抑制蛋白质的合成和DNA聚合酶,因此LICL不适合RNA准备体外翻译或逆转录。在这些情况下,使用乙酸钠。
    • 利用乙酸铵(2 m最终浓度)用于去除DNTP,但不要将其用于制备DNA作为铵离子抑制酶的T4聚核苷酸激酶反应。
  • 为了增加低浓度或小核酸碎片的降水量(小于100个核苷酸)
    • 添加MGCL2最终浓度为0.01M。
    • 在离心之前将冰孵育时间增加到1小时。

这种解释应该使您迅速了解乙醇降水的工作原理。如果您想了解更多有关乙醇降水和其他DNA清理方法的来源和出现的信息,则可能需要检查一下……

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最初发表于2007年12月4日。审查并重新发布了2021年3月。

图片来源:

154条评论

  1. 充实 2021年2月16日下午5:42

    没有乙醇的DNA提取如何?



  2. 比约恩 2020年10月13日下午6:13

    与“如何在DNA/RNA乙醇沉淀后获得完美的颗粒”的链接
    似乎死了。应该
    //www.epocanyc.com/13513/how-to-to-get-a-perfect-pellet-pellet-fter-dnarna-precipitation



    • 劳拉·格拉西(Laura Grassie) 2021年8月31日上午10:34

      谢谢,我们现在已经修复了此链接!



  3. RRC 2019年4月26日上午6:53

    假设在室温下将破坏的细胞和无细胞DNA放入90ml的95%乙醇中,如何直接从乙醇中提取DNA?



  4. 汉娜 2018年1月17日下午5:35

    它的coooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooo oooooooo oooooooo oooooooo oooooo oooooo oooooo oooooo oooooo oooooo oooooo oooooo ooooooooool……但是,疑问为什么DNA称为DNA DNA



    • 哈拉哈特 2018年2月21日下午10:25

      脱氧核糖核酸…换句话说,DNA具有糖脱氧核糖,显然是核酸。



  5. 法梅 2017年5月7日下午4:20

    非常感谢您的精彩文章。我们如何引用您的文章?我找不到发布的日期?



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