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用CRISPR干扰控制基因表达(CROSPRI)

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用CRISPR干扰控制基因表达(CROSPRI)

基因组编辑技术Crispr / Cas9是众所周知的,以协助研究人员操纵靶细胞的基因组并且已经存在在几篇帖子中讨论

本文是关于重新估算典型的基因组编辑技术,以干扰基因表达,称为CRISPR干扰(Crispri)。Crispri的目的是规定基因组而不是修改。使用此系统,您可以激活或压制基因表达。

从CRISPR到CRISPRI

通常的CRISPR系统由2个组分组成,“指南”(GRNA)和CRISPR相关的内切核酸酶(CAS 9)组成。

在CRISPRI系统中,您将催化死CAS 9(DCAS9)共同表达,缺乏内切核酸酶活性,具有GRNA。GRNA与您希望压制或激活的感兴趣基因的区域互补。

以下是CRISPRI系统的一些主要功能:

1.与典型核酸酶活性CAS9诱导的基因组修饰不同,DCAS9介导的基因干扰是可逆的,并且不会永久地修改基因组DNA。

2. DCAS9分子保留基于GRNA靶向序列结合靶DNA的能力,但不能切割靶DNA。

3.您可以用转录压缩机或激活器标记DCAS9以调节“目标基因”的表达。该概念在图1中示意性地示出。

图1_biteadbio_article1_crispr effectors_wiki.

图1:通过效应域的转录调节的示意图:a)。通过阻遏域(KRAB)与DCAS9对转录起始转录引发以阻断基因表达(异质色素化)B)。通过激活结构域(VP16)与DCAS9配对的转录激活以增加基因表达(修饰Wikimedia Commons.

4.最简单的基于DCAS9的活化剂和压缩机由直接融合到单个转录激活物(例如,DCAS9-VP64或DCAS9-VP16)或转录阻遏物(例如DCAS9-KRAB)的DCAS9组成。

5.目前仅限于细菌的基因活化,CRISPR介导的基因活化。

如何开始

一旦您决定为CRISPRI实验(镇压或激活)所需的遗传操作,选择如概述的表达系统附加网站。

您使用以下变量来帮助您选择:

  1. Cas9和GRNA的种类
  2. Cas9和GRNA启动子的启动子和表达模式
  3. 选择可选标记(药物或荧光团量化)
  4. 运输方式
  5. 检测方法

在成功递送GRNA和DCAS9(CRISPRI系统)到目标单元格后,您需要确定是否已发生所需的干扰。您的检测方法取决于您的特定应用程序。通常,在转染3-5天后,可以解离CRORPRI细胞并使用流式细胞术来检查单细胞水平的表达。BOB棋牌系统现在可以处理最多五个独立的操作(一次性激活/抑制5种不同的基因)。然而,该过程将受到可以在给定时间点插入到细胞中的引导RNA和蛋白质的限制,以进行预期的基因调控。

CRISPRI系统超越编辑,以便能够为精确的基因组调节提供众所周知的CRISP CAS9系统。CRISPRI系统具有良好的承担作为遗传编程平台的许多希望,具有生物医学和临床研究的潜在应用。

进一步阅读:

  1. dominguez aa,et。al。(2016)除了编辑之外:重新调整CRISPR-CAS9以获得精确基因组调控和审讯NAT Rev Mol Cell Biol。17(1):5-15。
  2. 吉尔伯特拉et。al。(2013)Crispr-介导的模块化RNA导向的真核生物转录调节细胞。154(2):442-51。
  3. Larson MH et。al。(2013)基因表达序列特异性控制的CRISPR干扰(CRISPRI)NAT。协议。8(11):2180-96。
  4. qi ls et。al。(2013)将CRISPR作为基因表达序列特异性控制的RNA引导平台细胞。152(5):1173-83。
  5. CRISPR / CAS9指南:网站https://www.addgene.org/crispr/guide/
  6. 齐和Weissman Labs Crisprprasmids:网站https://www.addgene.org/crispr/qi-weissman/
图像信用:NIH图像画廊

1条评论

  1. Kristian Laursen。 2016年6月8日在上午6:38

    有趣的作品,但有点过时了。最近的出版物以上面列出的参考文献为例,该领域已经移动。
    http://www.nature.com/nmeth/journal/v12/n4/fulll/nmeth.3312.html.

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