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研究科学家CRISPR的权威指南

CRISPR研究中心为您带来Sigma-Aldrich®高级基因组学

无论您是设计第一个CRISPR实验的帮助,您都在寻找故障排除技巧,还是想了解如何在研究中应用CRISPR,CRISPR Research Hub都可以适合您。

CRISPR是最著名的基因编辑工具,可让您轻松,精确地编辑DNA体外体内

但是,CRISPR技术已经超越了基本基因编辑,并开发了工具和技术,使您可以编辑表观基因组,甚至激活或抑制基因表达,而不会改变目标基因的基本DNA序列。

CRISPR提供了太多信息,以至于可能会感到不知所措。无论您想使用CRISPR做什么,我们精心制作的资源都可以找到并消化所需的信息。

您的CRISPR的完整指南
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    CRISPR解释了

    CRISPR基因编辑如何工作?

    如果您不熟悉CRISPR,或者您想刷新您的背景知识有关CRISPR基因编辑的工作方式,那么这就是适合您的部分。您可以发现历史记录并学习该基因编辑系统的组成部分,从蛋白播种器 - 亚种序(PAMS)到引导RNA(GRNA)。如果您不确定CRISPR是否是适合实验的正确基因编辑系统,则可以将其与其他基因编辑系统(包括锌指核酸酶(ZFN)和转录激活剂样效应核酸酶(Talens)进行比较。

    两只手改变DNA的图像描述CRISPR基因组编辑

    CRISPR-CAS9基因组编辑工具的简短历史

    了解如何首先发现CRISPR原核生物免疫反应系统以及CRISPR-CAS9基因编辑工具的开发。

    科学家的图像编辑DNA如CRISPR技术

    CRISPR技术解释说:迈向CRISPR基因组!

    从其作为细菌防御系统的根源到如何在健康和研究中使用它的概述。

    重量尺度代表权重衡量CRISPR CAS9的利弊

    CRISPR-CAS9基因组编辑:权衡利弊

    在您的研究中发现CRISPR的利弊是基因组编辑的工具。

    高级CRISPR

    通过高级应用程序将CRISPR提升到一个新的水平

    如果您想做的不仅仅是基本基因编辑,还可以发现对CRISPR技术的惊人改编。使用CAS9的修改版本,您可以使用CRISPRA和CRISPRI执行表观基因组编辑并激活或抑制基因表达(不改变DNA)。

    使用工具修改DNA来表示修饰的CRISPR核酸酶格式

    如何了解CRISPR格式及其应用

    找出CRISPR核酸酶的修饰变体如何提供降低靶向效应的基因编辑,甚至可以控制基因表达而无需改变DNA序列。

    DNA转录的图像显示CRISPR如何使用CRISPRA和CRISPRI修改基因表达

    为什么您应该考虑将CRISPRA和CRISPRI添加到工具箱中

    找出CRISPR介导的基因激活(CRISPRA)和抑制作用(CRISPRI)如何工作,以及为什么除了使用CRISPR敲除之外,还应考虑使用它们。

    灯开关降低了CRISPRA如何使您能够swtich基因表达

    基于CRISPR的激活(CRISPRA):操作指南

    CRISPRA允许您以更内源性的方式激活或过表达基因。找出入门的步骤。

    一个抱着扳手的僵尸描绘了死去的cas9对表观基因组编辑的有用性

    死亡有用:CRISPR-CAS9表现组编辑

    想做一些表观基因组编辑吗?发现催化无效(死)Cas9的有用性。

    CRISPR应用

    发现CRISPR的各种应用

    您是否考虑了CRISPR的特定应用,并且正在寻求帮助和指导?发现该技术在研究中使用的各种方式,并获取有关如何在特定应用中使用它的内部提示,例如在难以转移的细胞中执行CRISPR实验,例如T细胞等,我们还发现了您需要知道的内容以扩展到扩展CRISPR屏幕。

    amultiplex剧院的图像代表多重CRISPR实验

    多重CRISPR基因编辑:您需要知道的

    如果您需要多基因淘汰赛或大规模的基因组修饰,或者需要降低脱靶效果,那么多重CRISPR适合您!

    微孔板的图像显示如何将CRISPR缩放到进行CRISPR筛选。

    使用CRISPR升级您的药物筛查

    发现如何将CRISPR扩展到药物筛查应用中。

    T细胞和癌细胞的图像突出了如何使用CRISPR来增强T细胞抗癌能力。

    CRISPR的免疫肿瘤学方法

    T细胞对使用CRISPR的工程可能很棘手。在编辑这些细胞时找出关键因素,以及如何克服任何相关挑战。

    果蝇中CRISPR-CAS9编辑的果蝇的图像

    果蝇的CRISPR-CAS9编辑中的速成课程

    获取在果蝇中执行CRISPR-CAS9编辑的技巧。

    实验设计

    设置CRISPR实验的提示和技巧

    您准备好在实验室开始CRISPR了吗?本节将为您介绍CRISPR实验设计和设置的各个方面,从设计GRNA到选择合适的CRISPR试剂的方法。我们还涵盖了各种递送格式,包括DNA,质粒和核糖核蛋白(RNP)配合物,并建议您如何为实验选择正确的递送格式。

    用GRNA靶向DNA的CRISPR-CAS复合物的图像

    CRISPR基因编辑:考虑和入门

    在您的实验中,通过我们的主要考虑因素来发现如何从CRISPR基因编辑开始。

    CRISPR研究中心

    CRISPR核酸酶:选择的最终指南

    对CRISPR核酸酶感到困惑?阅读本指南,以发现可用的各种CRISPR核酸酶及其最适合的内容。

    室内设计的图像,代表如何设计CRISPR实验

    如何设计CRISPR CAS9实验并开始基因组编辑

    设计CRISPR实验可能令人生畏。我们有提示和指针可以帮助您右脚下车。

    显微注射的图像是交付CRISPR的一种方法

    将CRISPR试剂进入细胞的四种方法

    阅读有关提供CRISPR试剂以及如何在其之间进行选择的各种方法。

    一条道路,展示了从CRISPR开始的道路

    CRISPR基因组编辑:您需要知道的才能开始

    了解CRISPR可以为您做什么以及使用它涉及什么的想法。

    故障排除

    何时CRISPR出错时进行故障排除帮助

    如果您的实验中出现问题,或者您获得了结果,您将无法解释不要惊慌。我们已经有指南可以引导您完成如何解决CRISPR实验的解决方案,包括您需要使用哪些控件来确保您可以有效地进行故障排除以及如何解释令人困惑的结果。

    测序数据的图像以描绘验证CRISPR

    如何验证CRISPR实验

    从成功递送CRISPR试剂到确认所需的遗传和表型变化,发现如何验证CRISPR基因编辑。

    “有效”一词的图像强调确定CRISPR成功的重要性

    如何确认您的CRISPR-CAS9基因组编辑成功

    通过确定CRISPR实验每个阶段的失败成功来升级故障排除能力。

    最新的CRISPR文章

    随时了解最新的CRISPR文章

    amultiplex剧院的图像代表多重CRISPR实验

    多重CRISPR基因编辑:您需要知道的

    如果您需要多基因淘汰赛或大规模的基因组修饰,或者需要降低脱靶效果,那么多重CRISPR适合您!

    重量尺度代表权重衡量CRISPR CAS9的利弊

    CRISPR-CAS9基因组编辑:权衡利弊

    在您的研究中发现CRISPR的利弊是基因组编辑的工具。

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    CRISPR-CAS9基因组编辑工具的简短历史

    了解如何首先发现CRISPR原核生物免疫反应系统以及CRISPR-CAS9基因编辑工具的开发。

    一个像侦探一样打扮的侦探,象征着用于病毒诊断的检测和夏洛克CRISPR方法。

    CRISPR如何用于检测新兴的病毒病原体

    发现两种基于CRISPR的病毒诊断策略,即检测和夏洛克。

    T细胞和癌细胞的图像突出了如何使用CRISPR来增强T细胞抗癌能力。

    CRISPR的免疫肿瘤学方法

    T细胞对使用CRISPR的工程可能很棘手。在编辑这些细胞时找出关键因素,以及如何克服任何相关挑战。

    一个抱着扳手的僵尸描绘了死去的cas9对表观基因组编辑的有用性

    死亡有用:CRISPR-CAS9表现组编辑

    想做一些表观基因组编辑吗?发现催化无效(死)Cas9的有用性。

    灯开关降低了CRISPRA如何使您能够swtich基因表达

    基于CRISPR的激活(CRISPRA):操作指南

    CRISPRA允许您以更内源性的方式激活或过表达基因。找出入门的步骤。

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    如何确认您的CRISPR-CAS9基因组编辑成功

    通过确定CRISPR实验每个阶段的失败成功来升级故障排除能力。

    CRISPR术语

    CRISPR术语词汇表

    您是否不太确定CRISPR术语?我们编辑了CRISPR术语词汇表,以帮助您。只需单击术语旁边的箭头即可查看定义。

    CRISPR相关蛋白质。这是CRISPR复合物的核酸酶成分,这些蛋白质中最常见的是Cas9。

    CRISPR相关蛋白9。几个确定的CRISPR核酸酶之一。CAS9核酸酶是使用最广泛的CRISPR核酸酶。已经从不同的物种中鉴定出CAS9的不同变体。CAS9变体之间识别的PAM序列有所不同。

    CRISPR来自Prevotella弗朗西斯拉1。现在通常称为CAS12A的CRISPR核酸内切酶。CAS12A与CAS9的不同方式不同:它较小,更简单,它会产生交错而不是钝切割,它使用不同的PAM,并且在识别站点远端裂解。这些差异使其成为CAS9的有用替代方法。

    聚类,定期插入短的,短圆柱粒子重复序列。CRISPR技术最初是从序列中得出的名称。现在用于指代使用CRISPR核酸酶的基因编辑系统。

    CRISPR激活。使用催化无效CAS9(DCAS9)将转录激活剂靶向特定DNA/基因的技术以激活靶基因表达。

    CRISPR抑制。使用催化无活性CAS9(DCAS9)将转录阻遏物靶向特定DNA/基因抑制靶基因表达的技术。

    CRISPR RNA。包含负责CRISPR复合物对目标DNA的特异性的变量靶向序列的GRNA的组成部分。

    催化死亡的cas9。这是Cas9的催化无效形式,由两个核酸内切酶域(RUVC和HNH)中的点突变产生。这些点突变为D10A和H840A,并使核酸酶无法切割DNA。借助GRNA,核酸酶仍然可以靶向特定的DNA,并且通常与转录或表观遗传调节剂结合以修饰基因表达。

    供体DNA在CRISPR中使用同源指导维修(HDR)时需要。HDR允许精确的基因编辑,例如特定的插入和缺失或基础取代。

    双链休息。这是切割DNA分子的两个链,并完全断裂。

    功能增益。这是指赋予的附加函数或通过突变/基因编辑增强的电流功能。这可以指激活或增加基因/非编码RNA(NCRNA)的表达。

    指南RNA。这是将核酸酶靶向特定DNA序列的RNA。GRNA由脚手架RNA(tracrrna)和可变靶向RNA(CRRNA)组成,作为两个单独的RNA或单个指南RNA,其中两个组件融合了。

    同源指导的维修是两个细胞DNA修复途径之一。HDR可以用于CRISPR基因编辑中,其中需要非常精确的基因编辑,包括特定的插入和缺失或基础取代。供体DNA必须充当修复中的模板。

    功能丧失。这描述了突变或基因编辑,从而导致蛋白质或NCRNA的天然功能的丧失。在CRISPR基因编辑中,这可能是指蛋白质/NCRNA的表达丧失/降低或不活跃形式的表达(例如,截短的蛋白质缺少活性结构域)。

    crispr nickase。这些是Cas9的修改形式,在两个核酸内切酶域之一中具有点突变,从而导致它们“划分” DNA的一条链,而不是进行完整的双链断裂。将两个Nickase配对在一起,以创建所需的双链断裂。配对的镍酶有效地消除了脱靶效应,因为每个nickase都使用了不同的GRNA。

    非同源最终连接是两个细胞DNA修复途径之一。NHEJ是CRISPR基因编辑中更常用的途径,因为它比HDR更有效。但是,NHEJ也比HDR更容易出错。

    原始的蛋白序。目标位点下游的〜3–8个核苷酸序列是成功切割靶DNA所需的核酸酶。不同的核酸酶识别不同的PAM序列。

    核糖核蛋白复杂的。由CRISPR核酸酶蛋白和GRNA组成的复合物,可以输送到细胞中。

    单个诱导RNA。gRNA的常见格式,其中tracrrna和crRNA融合到单个RNA分子中。

    反式激活CRISPR RNA。GRNA的一个组成部分,充当crRNA和核酸酶之间的支架。

    有问题还是建议?

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